糖皮质激素依赖性皮炎香猪动物模型的建立及其皮肤病理变化分析

糖皮质激素依赖性皮炎香猪动物模型的建立及其皮肤病理变化分析

潘炜华、何金、刘晓刚、温海

目的：建立香猪糖皮质激素依赖性皮炎的动物模型，并探讨其病理特征。

方法：取4只香猪腿部及腹部白色皮毛处作为目标皮肤，分别按时间梯度外用糖皮质激素，形成糖皮质激素依赖性皮肤，取组织病理切片做HE染色和免疫组化染色。

结果：用低强度和中等强度药物的香猪在涂药期间及停药后皮肤未见明显变化，高强度组和超高强度组在用药50天左右皮肤上可见毛细血管扩张，并出现色素沉着斑；用药30天后表皮变化不明显，但黑素细胞出现上移现象，用药35天后上皮开始变薄，黑素细胞增多并上移。

结论：无论强弱差异，外用任何一种激素，用药时间超过1个月都会出现表皮萎缩和黑素细胞增多上移，表皮萎缩及黑素细胞增多程度与激素强度成正比。

关键词：糖皮质激素依赖性皮炎；香猪模型；病理基础

糖皮质激素依赖性皮炎是由于长期不适当外用皮质类固醇激素而引起的皮肤萎缩、毛细血管扩张及色素沉着，尽管这些现象已被皮肤科医生所公认，但出现这些皮肤变化的病理基础及变化规律目前研究尚少，因此我们选择与人类皮肤最为接近的香猪作为研究对象进行研究。

1材料和方法

1.1材料：4只2月龄香猪，2只雌性分别重11.2kg、11.9kg，2只雄性分别重12.1kg、12.7kg。每只猪取腿、腹部白色皮毛区作为目标皮肤，分别在左右两侧的前腿、后腿、腹部涂药，每只猪可取6个皮肤区域，以I、II、III、IV、V、VI区分。用75%的酒精作为溶液，将醋酸氢化考的松、地塞米松及丙酸氯倍他索纯药粉制成酊剂。浓度为：0.1%氢化考的松（低强度激素）、0.1%地塞米松（中等强度激素）、0.02%丙酸氯倍他索（高强度激素）、0.05%丙酸氯倍他索（超高强度激素）。

1.2方法：

4只香猪不分雌雄轻重，随机标记分别在同一只香猪的6个目标皮肤区域使用同一种上述已配好的激素溶液。在每只香猪的前腿根、后腿根及腹部左右对称部位各选10cm×10cm区域，用婴儿电动剃刀剃毛。用棉签蘸取激素溶液均匀涂于目标皮肤，I区域仅涂75%酒精作为空白对照，II、III、IV、V、VI区域按天数分别在用药第30、35、40、59、66天停药。

连续用药，每天涂药2次。观察用药期间及停药后局部皮肤变化，于第70天取所有目标区皮肤，用HE染色及免疫组化染色（Envision法）观察皮肤各层细胞变化。

2结果

2.1皮肤变化：

外用低强度和中等强度药物的香猪在涂药期间及停药后皮肤未见明显变化，高强度组和超高强度组在用药50天左右皮肤上可见毛细血管扩张，并出现色素沉着斑。停药后2天即出现红斑，炎症反应明显（图1～2），再次用药皮肤的炎症反应消退。对照I区域皮肤无改变。

2.2HE染色：

外用不同强度激素，均在用药35天后出现不同程度的上皮萎缩变薄，并随用药时间的延长，上皮萎缩加重，萎缩的程度与激素强度成正比。用药50天后皮肤出现毛细血管扩张。

图3～6为使用超高强度激素香猪的皮肤病理变化过程，对照区域I表皮无变化。

2.3免疫组化Envision法：

使用免疫组化法对黑素细胞进行染色，激素的强度越强，出现色素沉着越早。外用超高强度激素香猪在用药30天后就出现MART-1染色阳性细胞上移现象，并随时间增加MART-1染色阳性细胞增多并上移明显，而外用低强度激素香猪在用药40天后才出现MART-1染色阳性细胞上移现象。

图7～10为外用超高强度激素香猪的皮肤病理免疫组化Envision法动态变化过程。

3讨论

糖皮质激素依赖性皮炎作为皮肤科常见而棘手的问题，已引起广大临床医生的关注，我们曾用豚鼠模型对激素依赖性皮炎的病理改变进行研究，发现外用任何一种强度的激素，在用药1个月内都会出现程度不同的上皮萎缩，但用药1个月未发现黑素细胞增多，这可能与豚鼠皮肤较薄，与人类皮肤有较大差异有关，故未能对该疾病的病理改变过程有一个全面的了解。

由于猪的皮肤与人类皮肤近似，因此我们选择香猪对糖皮质激素依赖性皮炎作进一步研究，了解皮肤变化的病理基础，为治疗和预防本病提供理论依据。长期外用糖皮质激素会引起皮肤发生各种变化，但这个“长期”的时间并未得到界定，我们的实验观察发现，连续外用低强度和中等强度药物2个月的香猪在涂药期间及停药后皮肤未见明显变化，但用高强度和超高强度药物，在用药50天左右皮肤则出现毛细血管扩张，并有色素沉着斑。

停药后2天即出现红斑，炎症反应明显，再次用药皮肤的炎症反应消退，说明在外用激素50天左右就有出现糖皮质激依赖性皮炎的可能。尽管外用低强度或中等强度糖皮质激素2个月皮肤未见明显改变，但病理结果显示，外用任何强度的糖皮质激素，均可能在用药35天以后出现不同程度的上皮萎缩变薄，并随用药时间的延长，上皮萎缩加重，萎缩程度和激素强度成正比；用药50天后还可出现皮肤毛细血管扩张。提示外用激素皮肤出现萎缩的时间与使用激素的强度没有关联，但萎缩的程度可能与糖皮质激素强度有关。

免疫组化Envision法MART-1染色是一种用于对黑素细胞进行特异性染色的方法，我们发现在外用激素30天表皮MART-1染色阳性细胞即出现上移现象，并随用药时间的延长黑素细胞增多并不断上移，说明外用激素后皮肤出现色素沉着的改变早于出现萎缩的时间，这对于今天越来越在乎形象美的人们来说，更提出了一个警示。

激素依赖性皮炎的发病机制可能是多方面的，可能是由于类固醇使血管收缩而导致局部代谢产物如（NO）堆积，停药后便出现毛细血管扩张[3]；也可能是由于类固醇免疫抑制作用，使皮肤表面微生物过度繁殖，并作为超抗原介导免疫反应，同时释放炎症介质。

尽管皮肤是一个复杂的器官，与生物特性、物种及部位等多种因素相关，差异也很大，但就皮肤的结构与厚度来说，猪的皮肤与人类最为相似，因此这些激素导致皮肤发生变化的机制在人类不同部位的皮肤上同样发生作用，本实验为不适当外用糖皮质激素导致皮肤病变提供了理论依据。

参考文献：略